তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পরিমাণগত বিশ্লেষণের নীতি এবং পদ্ধতি

তরল ক্রোমাটোগ্রাফির পৃথকীকরণ প্রক্রিয়াটি দুটি পর্যায়ের জন্য মিশ্রণের উপাদানগুলির সখ্যতার পার্থক্যের উপর ভিত্তি করে।

বিভিন্ন স্থির পর্যায় অনুসারে, তরল ক্রোমাটোগ্রাফিকে তরল-সলিড ক্রোমাটোগ্রাফি, তরল-তরল ক্রোমাটোগ্রাফি এবং বন্ডেড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফিতে ভাগ করা হয়।সর্বাধিক ব্যবহৃত হয় তরল-সলিড ক্রোমাটোগ্রাফি যার ফিলার হিসাবে সিলিকা জেল এবং বন্ডেড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি ম্যাট্রিক্স হিসাবে মাইক্রোসিলিকা সহ।

স্থির পর্যায়ের ফর্ম অনুসারে, তরল ক্রোমাটোগ্রাফিকে কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি, কাগজের ক্রোমাটোগ্রাফি এবং পাতলা স্তরের ক্রোমাটোগ্রাফিতে ভাগ করা যায়।শোষণ ক্ষমতা অনুসারে, এটি শোষণ ক্রোমাটোগ্রাফি, পার্টিশন ক্রোমাটোগ্রাফি, আয়ন বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জেল পারমিয়েশন ক্রোমাটোগ্রাফিতে বিভক্ত করা যেতে পারে।

সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, বিচ্ছেদ প্রভাব উন্নত করার জন্য উচ্চ চাপের অধীনে মোবাইল ফেজ দ্রুত প্রবাহিত করার জন্য তরল কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেমে একটি উচ্চ-চাপ তরল প্রবাহ ব্যবস্থা যুক্ত করা হয়েছে, তাই উচ্চ-দক্ষতা (উচ্চ-চাপ হিসাবেও পরিচিত) তরল ক্রোমাটোগ্রাফি আবির্ভূত হয়েছে

অংশ
01 তরল ক্রোমাটোগ্রাফির পরিমাণগত বিশ্লেষণের নীতি

গুণগত ভিত্তিতে পরিমাপ করার জন্য, মান হিসাবে বিশুদ্ধ পদার্থ প্রয়োজন;

তরল ক্রোমাটোগ্রাফি পরিমাপ একটি অপেক্ষাকৃত পরিমাণগত পদ্ধতি: অর্থাৎ, মিশ্রণে বিশ্লেষকের পরিমাণ বিশুদ্ধ আদর্শ নমুনার পরিচিত পরিমাণ থেকে অনুমান করা হয়।

অংশ
02 লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য ভিত্তি

পরিমাপকৃত উপাদানের পরিমাণ (W) প্রতিক্রিয়া মানের (A) (পিক উচ্চতা বা পিক এলাকা), W=f×A এর সমানুপাতিক।

পরিমাণগত সংশোধন ফ্যাক্টর (f): এটি পরিমাণগত গণনার সূত্রের সমানুপাতিক ধ্রুবক, এবং এর প্রকৃত অর্থ হল ইউনিট প্রতিক্রিয়া মান (পিক এলাকা) দ্বারা উপস্থাপিত পরিমাপকৃত উপাদানের পরিমাণ।

পরিমাণগত সংশোধন ফ্যাক্টর স্ট্যান্ডার্ড নমুনার পরিচিত পরিমাণ এবং এর প্রতিক্রিয়া মান থেকে প্রাপ্ত করা যেতে পারে।

অজানা উপাদানের প্রতিক্রিয়া মান পরিমাপ করুন, এবং উপাদানের পরিমাণ পরিমাণগত সংশোধন ফ্যাক্টর দ্বারা প্রাপ্ত করা যেতে পারে।

অংশ
03 পরিমাণগত বিশ্লেষণে সাধারণ পদ

নমুনা (নমুনা): ক্রোমাটোগ্রাফিক বিশ্লেষণের জন্য একটি বিশ্লেষক ধারণকারী একটি সমাধান।স্ট্যান্ডার্ড এবং অজানা নমুনায় বিভক্ত।

স্ট্যান্ডার্ড: পরিচিত ঘনত্ব সহ একটি বিশুদ্ধ পণ্য।অজানা নমুনা (অজানা): যে মিশ্রণের ঘনত্ব পরীক্ষা করা হবে।

নমুনার ওজন: নমুনার আসল ওজন পরীক্ষা করা হবে।

তরলীকরণ: অজানা নমুনার তরলীকরণ ফ্যাক্টর।

উপাদান: পরিমাণগতভাবে বিশ্লেষণ করা ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখর, অর্থাৎ, যে বিশ্লেষক যার বিষয়বস্তু অজানা।

উপাদানের পরিমাণ (পরিমাণ): পদার্থের বিষয়বস্তু (বা ঘনত্ব) পরীক্ষা করা হবে।

অখণ্ডতা: একটি কম্পিউটার দ্বারা একটি ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরের শিখর এলাকা পরিমাপের গণনামূলক প্রক্রিয়া।

ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা: বিশ্লেষকের অজানা বিষয়বস্তু নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত স্ট্যান্ডার্ড পদার্থের একটি পরিচিত পরিমাণ থেকে প্রতিষ্ঠিত, প্রতিক্রিয়া মান বনাম উপাদান সামগ্রীর একটি রৈখিক বক্ররেখা।

অংশ
04 তরল ক্রোমাটোগ্রাফির পরিমাণগত বিশ্লেষণ

1. পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত একটি ক্রোমাটোগ্রাফিক পদ্ধতি নির্বাচন করুন:

l সনাক্ত করা উপাদানের শীর্ষ নিশ্চিত করুন এবং 1.5 এর বেশি একটি রেজোলিউশন (R) অর্জন করুন

l পরীক্ষিত উপাদানগুলির ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরগুলির ধারাবাহিকতা (বিশুদ্ধতা) নির্ধারণ করুন

l পদ্ধতির সনাক্তকরণ সীমা এবং পরিমাণ নির্ধারণের সীমা নির্ধারণ করুন;সংবেদনশীলতা এবং রৈখিক পরিসীমা

2. বিভিন্ন ঘনত্বের মানক নমুনা সহ একটি ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা স্থাপন করুন

3. পরিমাণগত পদ্ধতির যথার্থতা এবং নির্ভুলতা পরীক্ষা করুন

4. নমুনা সংগ্রহ, ডেটা প্রক্রিয়াকরণ এবং প্রতিবেদনের ফলাফল বাস্তবায়নের জন্য সংশ্লিষ্ট ক্রোমাটোগ্রাফি ম্যানেজমেন্ট সফ্টওয়্যার ব্যবহার করুন

অংশ
05 পরিমাণগত শিখর সনাক্তকরণ (গুণগত)

গুণগতভাবে প্রতিটি ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরকে পরিমাপ করার জন্য চিহ্নিত করুন

প্রথমত, ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরের ধারণ সময় (Rt) নির্ধারণ করতে মানক নমুনা ব্যবহার করুন।ধরে রাখার সময় তুলনা করে, অজানা নমুনায় প্রতিটি ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরের সাথে সংশ্লিষ্ট উপাদানটি খুঁজুন।ক্রোমাটোগ্রাফিক গুণগত পদ্ধতি হল মানক নমুনার সাথে ধরে রাখার সময় তুলনা করা।মানদণ্ড অপর্যাপ্তআরও নিশ্চিতকরণ (গুণগত)

1. স্ট্যান্ডার্ড সংযোজন পদ্ধতি

2. একই সময়ে অন্যান্য পদ্ধতি ব্যবহার করুন: অন্যান্য ক্রোমাটোগ্রাফিক পদ্ধতি (মেকানিজম পরিবর্তন করুন, যেমন: বিভিন্ন ক্রোমাটোগ্রাফিক কলাম ব্যবহার করে), অন্যান্য ডিটেক্টর (PDA: স্পেকট্রাম তুলনা, স্পেকট্রাম লাইব্রেরি অনুসন্ধান; MS: ভর স্পেকট্রাম বিশ্লেষণ, স্পেকট্রাম লাইব্রেরি অনুসন্ধান)

3. অন্যান্য যন্ত্র এবং পদ্ধতি

অংশ
06 পরিমাণগত পিক সামঞ্জস্যের নিশ্চিতকরণ

ক্রোমাটোগ্রাফিক সর্বোচ্চ সামঞ্জস্য নিশ্চিত করুন (বিশুদ্ধতা)

নিশ্চিত করুন যে প্রতিটি ক্রোমাটোগ্রাফিক শিখরের নীচে শুধুমাত্র একটি পরিমাপ করা উপাদান রয়েছে

সহ-ইলুটিং পদার্থ (অমেধ্য) থেকে হস্তক্ষেপ পরীক্ষা করুন

ক্রোমাটোগ্রাফিক পিক সামঞ্জস্য (বিশুদ্ধতা) নিশ্চিত করার পদ্ধতি

ফটোডিওড ম্যাট্রিক্স (পিডিএ) ডিটেক্টরের সাথে স্পেকট্রোগ্রামের তুলনা করা

পিক বিশুদ্ধতা সনাক্তকরণ

2996 বিশুদ্ধতা কোণ তত্ত্ব

অংশ 07-এ সাধারণত ব্যবহৃত পরিমাণগত পদ্ধতি

স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ পদ্ধতি, বহিরাগত স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতি এবং অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতিতে বিভক্ত:

1. বাহ্যিক মান পদ্ধতি: তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত হয়

প্রমিত নমুনা হিসাবে পরীক্ষা করার জন্য যৌগগুলির বিশুদ্ধ নমুনা ব্যবহার করে পরিচিত ঘনত্বের মানক নমুনার একটি সিরিজ প্রস্তুত করা হয়েছিল।কলামে এর প্রতিক্রিয়া মান (পিক এলাকা) পর্যন্ত ইনজেক্ট করা হয়।
একটি নির্দিষ্ট পরিসরের মধ্যে, আদর্শ নমুনার ঘনত্ব এবং প্রতিক্রিয়া মানের মধ্যে একটি ভাল রৈখিক সম্পর্ক রয়েছে, যথা W= f×A , এবং একটি আদর্শ বক্ররেখা তৈরি করা হয়।

ঠিক একই পরীক্ষামূলক অবস্থার অধীনে, পরিমাপ করা উপাদানটির প্রতিক্রিয়া মান পেতে অজানা নমুনাটি ইনজেকশন করুন।পরিচিত সহগ f অনুযায়ী, পরিমাপ করা উপাদানের ঘনত্ব প্রাপ্ত করা যেতে পারে।

বাহ্যিক স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতির সুবিধা:সহজ অপারেশন এবং গণনা, এটি একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত পরিমাণগত পদ্ধতি;প্রতিটি উপাদান সনাক্ত করা এবং eluted করা প্রয়োজন নেই;আদর্শ নমুনা প্রয়োজন;স্ট্যান্ডার্ড নমুনা এবং অজানা নমুনার পরিমাপের শর্তগুলি সামঞ্জস্যপূর্ণ হওয়া উচিত;ইনজেকশন ভলিউম সুনির্দিষ্ট হওয়া উচিত।

বাহ্যিক স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতির অসুবিধা:পরীক্ষামূলক অবস্থার উচ্চ হওয়া প্রয়োজন, যেমন ডিটেক্টরের সংবেদনশীলতা, প্রবাহের হার এবং মোবাইল ফেজের গঠন পরিবর্তন করা যাবে না;প্রতিটি ইনজেকশনের ভলিউম ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা থাকা উচিত।

2. অভ্যন্তরীণ মান পদ্ধতি: নির্ভুল, কিন্তু ঝামেলাপূর্ণ, সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতিতে

একটি মিশ্র মান তৈরি করতে অভ্যন্তরীণ মানের একটি পরিচিত পরিমাণ স্ট্যান্ডার্ডে যোগ করা হয় এবং পরিচিত ঘনত্বের কাজের মানগুলির একটি সিরিজ প্রস্তুত করা হয়।মিশ্র স্ট্যান্ডার্ডে স্ট্যান্ডার্ড থেকে অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ডের মোলার অনুপাত অপরিবর্তিত থাকে।ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামে ইনজেক্ট করুন এবং প্রতিক্রিয়া মান হিসাবে (স্ট্যান্ডার্ড নমুনা পিক এলাকা/অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড নমুনা পিক এলাকা) নিন।রেসপন্স ভ্যালু এবং ওয়ার্কিং স্ট্যান্ডার্ডের ঘনত্বের মধ্যে রৈখিক সম্পর্ক অনুসারে, যেমন W= f×A, একটি আদর্শ বক্ররেখা তৈরি করা হয়।

অজানা নমুনায় একটি পরিচিত পরিমাণ অভ্যন্তরীণ মান যুক্ত করা হয় এবং পরিমাপ করা উপাদানটির প্রতিক্রিয়া মান পেতে কলামে ইনজেকশন দেওয়া হয়।পরিচিত সহগ f অনুযায়ী, পরিমাপ করা উপাদানের ঘনত্ব প্রাপ্ত করা যেতে পারে।

অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতির বৈশিষ্ট্য:অপারেশন চলাকালীন, নমুনা এবং অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড একসাথে মিশ্রিত হয় এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামে ইনজেকশন দেওয়া হয়, তাই যতক্ষণ পর্যন্ত মিশ্র দ্রবণে অভ্যন্তরীণ মানের সাথে পরিমাপকৃত উপাদানের পরিমাণের অনুপাত স্থির থাকে, নমুনার আয়তনের পরিবর্তন হয়। পরিমাণগত ফলাফল প্রভাবিত করবে না।.অভ্যন্তরীণ স্ট্যান্ডার্ড পদ্ধতি নমুনা ভলিউম এবং এমনকি মোবাইল ফেজ এবং ডিটেক্টরের প্রভাব অফসেট করে, তাই এটি বহিরাগত মান পদ্ধতির চেয়ে আরও সঠিক।

অংশ
08 পরিমাণগত বিশ্লেষণের ফলাফলগুলিকে প্রভাবিত করে

দুর্বল নির্ভুলতার কারণে হতে পারে:

ভুল পিক এরিয়া ইন্টিগ্রেশন, নমুনা তৈরির সময় নমুনার পচন বা অমেধ্য প্রবর্তন, নমুনার শিশি সিল করা হয়নি, নমুনা বা দ্রাবক উদ্বায়ীকরণ, ভুল নমুনা প্রস্তুতি, নমুনা ইনজেকশন সমস্যা, ভুল অভ্যন্তরীণ মান প্রস্তুতি

দুর্বল নির্ভুলতার সম্ভাব্য কারণ:

ভুল পিক ইন্টিগ্রেশন, ইনজেকশন বা ইনজেক্টর সমস্যা, নমুনা পচন বা অমেধ্য নমুনা প্রস্তুতির সময় প্রবর্তিত, ক্রোমাটোগ্রাফিক সমস্যা, ডিগ্রেডেড ডিটেক্টর প্রতিক্রিয়া